要在Blazor Server应用程序中使用Windows身份验证进行SignalR，您需要进行以下设置：

1. 在Startup.cs文件中，确保在ConfigureServices方法中添加以下代码：

services.AddAuthentication(NegotiateDefaults.AuthenticationScheme)
    .AddNegotiate();

2. 在Configure方法中添加以下代码：

app.UseAuthentication();

3. 确保您的SignalR Hub位于/hubs路径下。在Startup.cs中的ConfigureServices方法中添加以下代码：

services.AddSignalR().AddHubOptions(options =>
{
    options.EnableDetailedErrors = true;
    options.ClientTimeoutInterval = TimeSpan.FromSeconds(30);
}).AddNegotiate();

4. 在您的SignalR Hub类上添加[Authorize]特性，以确保只有经过身份验证的用户可以访问它。例如：

[Authorize]
public class YourHubClass : Hub
{
    // your hub code here
}

5. 确保您的客户端代码中的连接选项包含withCredentials: true。例如：

const connection = new signalR.HubConnectionBuilder()
    .withUrl("/hubs/yourHub", { withCredentials: true })
    .build();

这些步骤将启用Windows身份验证并确保SignalR Hub只能由经过身份验证的用户访问。如果仍然收到401错误，请确保您的应用程序已配置为使用Windows身份验证，并且用户具有适当的权限。